Медицинская энциклопедия г. Москвы

Единая медицинская справочная
122

Госпитализации граждан РФ
в стационары Москвы по ОМС
+7 (495) 587-70-88
Горячая линия проекта "Москва-столица здоровья"

Артрит-энцефалит коз

Июн 28, 2016

Артрит-энцефалит коз (англ. — Caprine arthritis/encephalitis, или CAE) является вирусным заболеванием, распространенным во многих странах мира. Многочисленные опыты подтверждают, что именно международная торговля является основным фактором распространения инфекции между различными регионами. Кроме того, CAE — это медленная инфекция, для которой характерно отсутствие сезонности и периодичности эпизоотии, географической принадлежности. Учитывая эпизоотологические особенности CAE, можно предположить вероятность большей распространенности этой болезни в зарубежных странах, чем это показывают данные МЭБ.

Чаще всего вирус встречается в районах интенсивного козоводства — Европе, Австралии, США. Только у 1-2% инфицированных животных болезнь влияет на ЦНС, в то же время у 30-40% коз определяют поражение суставов. Наибольшей группой риска являются козлята в возрасте 1-5 месяцев. Для нашей страны болезнь является экзотической и неизученной. По клиническим признакам вирус CAE похож на синдром Висна-Мэди у овец. В ранних сообщениях он был описан как Висна-Мэди: по аналогии с аденоматозом овец, артрит-энцефалит коз проявляется атаксией, гиперестезия, иногда лихорадкой, прогрессивными парезами конечностей, в свою очередь перерастают в паралич. Процесс чаще начинается с задних конечностей и распространяется на передние.

Передача вируса в стаде легко происходит путем выпаивания инфицированного молока козлятам — это основной способ распространения инфекции. Даже однократное введение CAEV-загрязненного молока или молозива козленку хватает для возникновения инфекции. У взрослых коз инфекция распространяется путем вдыхания респираторных секретов. Этот путь заражения требует длительного прямого контакта между животными. Аналогично было показано наличие CAEV в сперме инфицированных козлов, но половой путь инфицирования не подтверждался. Широкому распространению инфекции также способствует симптомокомплекс поражения ЦНС, суставов, легких. Картина крови обычно без изменений, иногда может наблюдаться лимфопения. В цереброспинальной жидкости отмечается плеоцитоз, в основном через мононуклеарные клетки и увеличение количества белка. Течение болезни — несколько недель, результат — летальный.

Клинические признаки САЭ у козы

Фото 1. Клинические признаки САЭ у козы (увеличение путового сустава)

Клинические признаки проявляются у примерно 20% коз, инфицированных CAE вирусом (фото 1). Самым распространенным проявлением является артрит, который прежде всего наблюдается у взрослых коз, но может проявиться и у молодняка. У пораженных вирусом коз шерсть может поредеть, на более поздних стадиях заболевания наблюдается потеря веса и хроническое истощение.

Козленок в возрасте 2 месяца инфицированный вирусом

Фото 2. Козленок в возрасте 2 месяца инфицированный вирусом (клинические признаки болезни не проявляются)

Энцефаломиелит, как правило, поражает козлят в возрасте 2-4 месяцев, но наблюдается и у козлят старшего возраста и у взрослых коз. У инфицированных козлят сначала проявляется общая слабость, атаксия и слабость в задних конечностях (фото 2). Гипертония и гиперрефлексия также распространены. Впоследствии признаки прогрессируют к парезу и параличу. Депрессивное состояние, опущенная голова и движение по кругу были неоднократно описаны в исследованиях. Интерстициальная пневмония вирусной инфекции CAE редко вызывает клинические признаки у козлят. Однако у взрослых коз серологические признаки вирусной инфекции CAE, хроническая интерстициальная пневмония, ведут к прогрессивной одышки, были задокументированы неоднократно. Синдром «жесткого вымени» связан с инфекцией вируса CAE и характеризуется жесткими опухшими молочными железами. Хотя молочные железы можно размягчить, и они будут производить молоко. На качество молока вирус не влияет.

Патологоанатомические признаки

Патологоанатомические изменения локализуются в центральной нервной системе, суставах и легких. Наиболее выраженные поражения чаще выявляются в шейных и грудных участках спинного мозга. В суставах выявляется гиперплазия синовиальных клеток. В случае прогрессирования болезни нарастают дегенеративные изменения, такие как фиброз, некроз и минерализация синовиальных оболочек. В легких — интерстициальная пневмония, гиперплазия лимфоидной ткани.

Диагностика

Диагноз устанавливают на основании клинико-эпизоотологических данных и результатов патолого-гистологических, вирусологических (культивирование возбудителя на культурах тканей и типизация в РДП, ИФА) и серологических (РИД, ИФА, РН) исследований. На дифференциальной диагностике следует исключить инфекционные болезни: Висна-Мэди, скрепи, листериоз, полиоенцефаломаляцию, токсоплазмоз, болезнь Борна; другие заболевания мышечной и скелетной систем (недостаток витамина Е и меди, септические артриты и травмы).

Профилактика

После заражения у инфицированных животных образуются сывороточные антитела, которые не создают защиты. Средства специфической профилактики не разработаны. Меры борьбы сводятся к проведению в неблагополучном хозяйстве ветеринарно-санитарных мероприятий, выявления и выбраковка больных и серопозитивных животных. Несколько недавних исследований в Польше показали, что распространенность CAE среди поголовья коз колеблется от 4,2 до 80%, но в большинстве стад было около 30-40%. В одном из товарных польских хозяйств вообще все взрослые животные были больными.

Для сравнения — в Норвегии распространенность внутри стад колеблется от 11,5 до 97,3%. Исследование, проведенное в стадах молочных коз в Калифорнии, показало, что носителями вируса являются от 38,3 до 80,1%. Очевидно, распространенность внутри стада увеличивается пропорционально сроку, прошедшее с момента инфицирования. Поскольку вирус передается преимущественно через инфицированное молоко, эффективными мерами оздоровления стада является отлучение козлят сразу после рождения и выращивания их в строгой изоляции, скармливая молозиво здоровых коз или пастеризованное молоко, скармливание молозива только после прогрева в течение 60 мин при температуре +56 ° С. Проводят серологический контроль выращенных таким образом коз на наличие антител к вирусу САЭ в РДП или ИФА с 6-месячным интервалом. Хозяйство считается оздоровленным, если в нем не обнаружено ни одного положительного на вирус животного.

МИР ПЛЕМЕННЫХ КОЗ

Друзья, наш форум открыт! Эта площадка для Вас! Общайтесь, задавайте вопросы и находите ответы, обменивайтесь опытом, делайте украинское козоводство продуктивным и эффективным! Приглашаем всех неравнодушных к козоводству Украины, к сотрудничеству! Пусть информация, по возможности, станет открытой и доступной. Распространение материалов портала приветствуется с обязательным указанием ссылки на kozovodstvo.center
Ваша Алексеева Марина

Исследование коз на САЕ

Исследование коз на САЕ

Сообщение Чижик » 21 июл 2017, 22:00

Наконец-то.
Наконец-то.
Наконец-то.

да, наконец-то в Украине появилась сертифицированная лаборатория, которая делает лабораторные исследования на САЕ. и этой лабораторией является лаборатория «SMARTBIOLAB»

САЕ — артрит энцефалит коз — АЭК — относится к инфекционным болезням первой группы и я очень рада что в Украине наконец-то есть лаборатория которая делает исследование на САЕ.

Мир заботливо и с любовью держит меня в своих ладонях, одаривая, согревая, сохраняя,защищая, ограждая и взращивая

Исследование коз на САЕ

Сообщение Чижик » 21 июл 2017, 22:07

Вирус козьего артрита-энцефалита — Caprine arthritis encephalitis virus (CAEV).

Артрит-энцефалит коз (АЭК) — это медленно протекающее вирусное заболевание, поражающее три системы — ЦНС, опорно-двигательную (суставы) и дыхательную (легкие) у коз, овец и КРС (в основном молодняк), вызывая в последствии 100 % гибель зараженных животных.

Первыми о болезни с подобной симптоматической картиной у домашних коз сообщили D. Stavrou и другие ученые в 1969 году. С помощью бесклеточной суспензии, приготовленной из органов случайно заболевших животных,удалось экспериментально воспроизвести болезнь на козах и выделить вирус, имевший при электронно-микроскопическом исследовании морфологическое сходство с вирусом Висна-Мэди овец (ВМО).

Возбудителем АЭК является вирус с длительным инкубационным периодом, относящийся к семейству ретровирусов (Retroviridae), роду лентивирусов (Lentivirus), куда входят также антигенно и генетически родственные вирусы: висна-мэди овец, инфекционной анемии лошадей, иммунодефицита КРС, кошачьего иммунодефицита, иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и другие.

АЭК широко распространена во всем мире, из 161 стран болезнь зарегистрирована уже в 41-ой стране Мира, особенно в странах с развитым молочным козоводством и совпадает с международным перемещением Европейских пород молочных коз, особенно из-за отсутствии обязательной диагностики данной болезни во время карантинирования коз.
Список стран: США (38-81% зараженных от общего поголовья коз), Канада, Мексика (1997), Бразилия (1996), Венесуэла (1996), Доминиканская Республика (1998), Перу, Австралия, Новая Зеландия, Фиджи, Япония (2002), Франция, Швейцария, Испания, Дания, Исландия, Италия, Германия, Лихтенштейн (2000), Норвегия, Испания (1996), Словакия (1996), Бельгия (2000), Великобритания,Венгрия (1996), Босния и Герцеговина (2005), Болгария (2001), Латвия (2002), Россия (2003), Тунис (1995), Морокко (2002), Кения, Тринидад и Тобаго (1996) и другие страны.
В России установлена циркуляция вируса АЭК среди поголовья коз и КРС на территории Московской, Липецкой, Ленинградской, Брянской, Ивановской, Калужской, Владимирской, Тверской областей РФ. Эпизоотологическое моделирование АЭК показывает, что зоны высокого риска возникновения АЭК в РФ включают Центральный, Южный, Приволжский, Северо-Кавказский, Уральский федеральные округа, а также субъекты Сибирского и Дальневосточного округов, прилегающие к южной границе страны.

Вирус АЭК поражает в основном белые клетки крови и перемещается по организму внутри этих клеток. Без клетки вирус быстро погибает. Любая секреция от инфицированного животного, которая содержит лейкоциты (молоко, кровь, слюна, слезы, слизь дыхательных путей) будет содержать вирус. Вирус также был найден в яйцеклетках и в сперме.

Он чувствителен к высоким температурам, но устойчив к низким температурам и относительно — ультрафиолетовому излучению.

После интрацеребрального, интраартикулярного или интраперитонеального заражения развиваются разного рода изменения. Через 7 дней появляются первые воспалительные повреждения в головном мозге, суставах и легких, которые сохраняются в течение 8-21 месяца, независимо от возраста животных. В лейкоцитах жизнеспособный вирус обнаруживается начиная со 2-й недели после заражения в течение всей жизни животного. Как только клетки хозяина поражаются вирусом, они остаются инфицированными в течение всей жизни хозяина. Единственный способ удаления инфекции из организма это уничтожение зараженной клетки. После заражения вирусом в организмы вырабатываются антитела, которые не обеспечивают защиту организма, но являются хорошим индикатором для диагностики заболевания. Антитела начинают вырабатываться от 2-х месяцев до 2-х лет.

Читайте также:  Как лечить простуду у собаки

Пути передачи вируса.

Основные это молозиво и сырое молоко (выпаивание, доение, молокоборудование, грязные руки дояра), но также через кровь (иглы, тату, обезроживание, машинки для стрижки, открытые раны), слюну (облизивание, корм, вода, подстилка, тесный контакт), слезы (тесный контакт, подстилка), слизь дыхательных путей (тесный контакт), секреция родовых путей (роды, кесарево сечение). Внутриутробно, через яйцеклетки, эмбрионы и сперму в меньшей степени, но возможно и доказано.

Спектр восприимчивых к вирусу АЭК животных не ограничивается парнокопытными жвачными и в эпизоотологический процесс могут вовлекаться грызуны, собаки, кошки, приматы и т д. В настоящее время доказано, что в естественных условия межвидовые передачи регулярно происходят от коз к овцам в обоих направлениях. Установлена персистенция вируса (это когда вирус находится в активном состоянии, хотя по всем срокам уже должен был исчезнуть из
организма) АЭК в течение не менее 60-ти суток в организме экспериментально зараженных мышей, что свидетельствует о возможности циркуляции его среди грызунов в природе, где они могут служить резервуаром инфекции. Получены доказательства инфицирования вирусом АЭК людей и крупного рогатого скота, особенно массово это происходит в Мексике. Среди коз более восприимчивы культурные породы, аборигенные породы имеют иммунитет.

Клинические признаки проявляются только у молодых животных (1-6 месяцев) или у животных с низким иммунитетом (плохое содержание и кормление, стрессы), что составляет около 30-35 % от общего числа зараженных животных. Остальные сероположительные животные (около 65-70%) при хороших условиях содержания и кормления остаются без проявления клинических признаков в течение многих лет (до 4-5 лет) или пожизненно, при этом они могут дальше продуктироваться и воспроизводится при соблюдении определенных условий безопасности.

Всех животных делят на 3 условные группы:

1. Отрицательная — когда животное дает не менее двух отрицательных результатов с промежутком 6 месяцев и это животное находится в благополучном стаде (без сероположительных животных в стаде) или привезенное из благополучного стада после карантина и двух подряд отрицательных результатов.

2. Неопределенная — когда животное дает то положительный, то отрицательный результат, в результате сероконверсии (от 1 до 6 месяцев) из-за беременности, другого хронического или острого заболевания, недостаточного количества антител, или животное рожденное от сероположительной матери или отца. Такие животные могут быть переведены в другой статус (отрицательный или положительный) после последующей диагностики.

3. Положительная — животное является носителем вируса после двукратного положительного теста с промежутком в один месяц. Положительных животных и их потомство уничтожают, особенно с клиническими признаками, если животное высокоценно, то создают карантинную сероположительную группу с определенными условиями содержания и размножения.

Клинические признаки возникают когда клетки, несущие латентный вирус, созревают и размножаются (от 2-х месяцев до 2-х лет) в нужных органах организма (молочная железа, легкие, оболочки сухожилий, суставы и нервная ткань), вызывая соответствующие симптомы болезни:

• вирусный мастит — увеличение лейкоцитов в молоке, гипогалактия или агалактия, синдром «жесткого вымени». Признаки: асимметрия вымени, обширные уплотнения;
• артрит — чаще у взрослых животных — 30-40% в возрасте от года и старше. Чаще поражаются запястные и скакательные суставы. Болезнь внезапная и прогрессирующая, иногда бывают рецидивы. Признаки: опухание суставов, боль при движении, хромота, нарушения позы, деформация суставов, снижение веса;
• пневмония — прогрессирующая интерстициальная. Признаки: потеря веса, одышка, не встают;
• менингит или энцефалит или миелит — чаще у молодняка (1-6 месяцев) или взрослых (1-2 %). Признаки: медленно развивающиеся парезы и параличи. Начинается с задних конечностей и переходит на передние. Отставание в росте. У взрослых может быть также слепота, тремор головы, наклоны головы, манежные движения, атрофия мышц.

Крупный рогатый скот восприимчив к заражению вирусом АЭК, болезнь протекает с характерными клиническими и патологоанатомическими признаками и вирусоносительством.

Патоморфологические изменения у естественно и экспериментально инфицированных животных локализуются в ЦНС, суставах и легких.

В ЦНС изменения выявляют в белом веществе головного и спинного мозга и мозжечке. Наиболее выраженные поражения чаще обнаруживаются в шейных и грудных отделах спинного мозга. Микроскопически поражения характеризуются образованием плотных периваскулярных муфт из мононуклеарных клеток, формированием лимфоцитарных инфильтратов, пролиферации и выраженной первичной демиелинизацией.

В тяжелых случаях участки нервных клеток замещаются глиальными рубцами. В суставах обнаруживается гиперплазия синовиальных клеток, лимфопитарная и плазмоклеточная инфильтрация. При прогрессировании болезни нарастают дегенеративные изменения, такие как фиброз, некроз, и минерализация синовильных оболочек, появляются периартикулярные коллагенозные структуры. В легких — интерстициальная пневмония, гиперплазия перибронхиальной лимфоидной ткани. Ткань легкого диффузно уплотняется и по консистенции напоминает губчатую резину.

Картина крови, как правило, без изменений, иногда может наблюдаться лимфопения. В цереброспинальной жидкости отмечается плеоцитоз, в основном за счет мононуклеарных клеток и увеличение количества белка.

Диагноз на АЭК устанавливают па основании данных эпизоотического анализа, клинического осмотра, патоморфологических данных, а также результатов лабораторных исследований.

Для обнаружения вирусоспецифических антител наибольшее распространение получили реакция диффузионной преципитации в агаре (РДП) и иммуноферментный анализ (ИФА), а для обнаружения вирусного генома используют молекулярно-бпологический метод — ПЦР.

ПЦР позволяет обнаруживать геном вируса АЭК в пробах культурального материала и крови
инфицированных животных на ранних стадиях заболевания (начиная с 45 суток) и дифференцировать его от других близкородственных ретровирусов (Мэди-Висна, аденоматоз). Данная реакция пригодна для проведения эпизоотологического мониторинга АЭК и использования при осуществлении мер борьбы с АЭК в неблагополучных хозяйствах.

Дифференциальный диагноз. В первую очередь дифференцируют от Мэди-Висна овец и коз. АЭК дифференцируют в зависимости от формы клиники.

Артритную форму отличают от:

травматического артрита, инфекционного артрита вызванного микоплазмозом.

Нервную форму отличают у козлят от: прогрессивного парезы, энзоотической атаксии, спинномозговых форм гельминтозов (нематоды, вертячка), травм спинного мозга или абсцессов, а также врожденных аномалий спинного мозга и позвоночника; у взрослых коз нервную форму еще отличают от листериоза, бешенства и полиэнцефаломиелита.

Легочную форму отличают от казеозного лимфаденита. Маститную форму от туберкулезного мастита.

Лечение не разработано. Вакцин нет. Селекция на устойчивость к вирусу пород мало изучена.

Меры борьбы и профилактика.

АЭК относится к группе болезней, подлежащих обязательной регистрации (заявке) в МЭБ (Международное Эпизоотическое Бюро), независимо от формы течения и проявления болезни (клиническая, латентная) и метода диагностики (серологический, биофизический). Согласно
ветеринарно-санитарным правилам, принятым в зарубежных странах, при возникновении болезни вводится карантин с сопутствующими мероприятиями предосторожности на границе и внутри страны.

Меры борьбы:

1. Регулярное проведение лабораторных исследований всего стада — 1-2 раза в год. Козлят можно начинать исследовать с 6 месячного возраста. Нельзя исследовать беременных, больных животных или сразу после вакцинации (не менее 30 дней после введения любых вакцин).

2. Выпаивание козлят молозивом здоровых коз или простерилизованным молозивом или их заменителями. Пастеризация молозива — при температуре +59 град в течении 60 минут, чтобы инактивировать вирус. Рекомендуется использовать водяную баню или пароварку для точной регулировки температуры. Большое количество молозива можно после пастеризации
замораживать небольшими порциями (разовая порция выпаивания). При нагревании выше +59 градусов, полезность молозива будет значительно снижена из-за денатурации белков, в том числе антител.

3. Единственное эффективное средство борьбы — убой всех животных в неблагополучных и подозреваемых в неблагополучии хозяйствах, поскольку специфические меры профилактики не разработаны. Кроме того, появление этой болезни ведет к ограничениям при экспорте и импорте племенного поголовья.

4. Метод изолированного выращивания козлят от сероположительных коз — при родах не допустить контакта козленка с матерью, ее калом, мочой и подстилкой. Не дать козе облизать козленка. То есть принять козленка в чистые руки и унести его в карантинный блок и там уже проводить остальные манипуляции.

5. Дезинфекция фенольными соединениями и соединениями четвертичного аммония.

6. Использовать козлов-производителей (или сперму) с отрицательными результатами за 30 дней до сбора спермы или случки или проверенных козлов-производителей.

7. При выявлении положительного результата, повторно исследовать можно не раньше чем через 2 недели. После 3-х лет стабильно отрицательных результатов можно утверждать что ферма чистая.

8. Создание «сероположительных» изолированных стад с особо ценными племенными животными для получения от них потомства. Граница между группами должна быть не менее 2-х метров, а лучше 3-4 метра.

9. Предупредить занос возбудителя инфекции в хозяйство, необходимо пополнять поголовье только из тех стад, в которых в течение последних нескольких лет не было зарегистрировано клинических случаев заболевания, не выявлены серопозитивные животные и не было поступления новых коз.

Экономический ущерб при этом складывается в основном из выбраковки из стад клинически больных животных и вирусоносителей, а также недополучении молока.

Читайте также:  Бобы полезные свойства

Высокие факторы риска развития АЭК:

1. Кормление козлят смешанным молоком (от нескольких коз).

2. Плохая гигиена.

3. Смешение коз из разных хозяйств без карантина и анализов, а также выставки и места продаж.

5. Использование непроверенного персонала (особенно дояров)

6. Общее доение непроверенных коз.

Мир заботливо и с любовью держит меня в своих ладонях, одаривая, согревая, сохраняя,защищая, ограждая и взращивая

Эпизоотологический мониторинг и совершенствование мер борьбы с артритом-энцефалитом коз в РФ Волкова Ирина Юсупджановна

Эпизоотологический мониторинг и совершенствование мер борьбы с артритом-энцефалитом коз в РФ

Волкова Ирина Юсупджановна. Эпизоотологический мониторинг и совершенствование мер борьбы с артритом-энцефалитом коз в РФ : диссертация . кандидата ветеринарных наук : 16.00.03 / Волкова Ирина Юсупджановна; [Место защиты: Всерос. науч.-исслед. ин-т ветеринар. вирусологии и микробиологии]. — Покров, 2008. — 132 с. : ил. РГБ ОД, 61:08-16/57

Содержание к диссертации

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 12

1.1. Краткая характеристика артрита-энцефалита коз 12

1.1.1. Клиническая картина 15

1.1.2. Патологоанатомические изменения 16

1.2. Морфология, физико-химическая характеристика и строение генома лентивирусов 17

1.3. Распространение АЭК в мире 22

1.4. Методы диагностики, вирусологического и серологического мониторинга АЭК 24

1.4.1. Выделение вируса АЭК 25

1.4.2. Реакция диффузной преципитации (иммунодиффузии) 27

1.4.3. Твердофазный иммуноферментный анализ 28

1.4.4. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 30

1.4.5. Реакция непрямой иммунофлуоресценции 32

1.4.6. Экспериментальная инфекция 33

1.5. Дифференциальная диагностика 34

1.6. Профилактика и меры борьбы 34

1.7. Заключение по обзору литературы 37

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 38

2.1. Материалы 38

2.1.2. Животные 38

2.1.3. Культуры клеток 38

2.1.4. Питательные среды и добавки 39

2.1.5. Сыворотки крови 39

2.1.6. Полевой материал 40

2.1.7. Ферменты 40

2.1.8. Реактивы и оборудование, использованные в работе 40

2.2.1. Культивирование вируса АЭК 42

2.2.2. Приготовление специфических и нормальных культуральных антигенов 44

2.2.3. Получение форменных элементов крови 44

2.2.4. Выделение’нуклеиновых кислот 44

2.2.5. Синтез к ДНК 46

2.2.6. Постановка ПЦР 46

2.2.7. Анализ ПЦР продуктов 47

2.2.8. Компьютерный анализ 47

2.2.9. Выделение РНК вируса АЭК из инфицированных лейкоцитов периферической крови, клеток культуры ЛЭО и проб патологического материала 48

2.2.10. Экспериментальное заражение животных 48

2.2.11. Получение сывороток крови 48

2.2.12. Статистические методы исследования 49

2.2.13. Единый метод эпизоотологического исследования 49

2.3. Результаты собственных исследований 49

2.3.1. Сравнительно-географический и сравнительно-исторический анализ распространения АЭК в мире 49

2.3.2. Определение и ранжирование зон риска возникновения АЭК в различных географических и климатических зонах РФ 58

2.3.3. Разработка тест-системы для выявления РНК вируса артрита-энцефалита коз методом полимеразной цепной реакции 60

2.3.4. Эпизоотологический мониторинг АЭК на территории РФ 69

2.3.5. Изучение восприимчивости культур клеток, лабораторных и сельскохозяйственных животных к вирусу АЭК 84

2.3.6. Изучение особенностей клинического проявления и патоморфологических изменений при АЭК у естественно инфицированных коз.89

2.3.7. Разработка мероприятий по профилактике и ликвидации АЭК в хозяйствах РФ и апробация их на практике 93

3. ОБСУЖДЕНИЕ 95

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 104

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 105

7. ПРИЛОЖЕНИЯ 116

Введение к работе

Актуальность темы. Артрит-энцефалит коз (АЭК) — болезнь,
характеризующаяся длительным инкубационным периодом,

продолжительным течением и персистенцпей вируса. Артрит-энцефалит коз поражает коз, вызывая гибель 100% зараженных животных.

Возбудителем артрита-энцефалита коз является вирус, относящийся к семейству ретровирусов, роду лентивпрусов, куда входят также антигенно и генетически родственные вирусы висиа-маеди овец, инфекционной анемии лошадей и иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2)[1; 10; 28; 91].

Болезнь поражает козлят, ягнят и телят. Предположительно, спектр восприимчивых к вирусу АЭК животных не ограничивается парнокопытными жвачными и в эпизоотологический процесс могут вовлекаться грызуны, собаки, кошки, приматы и т.д. [14; 40; 45].

АЭК является медленной инфекцией животных — традиционно сложившееся наименование группы инфекционных болезней, которая представляет собой серьёзную проблему для животноводства в связи с их скрытым течением, летальным исходом, отсутствием средств лечения и профилактики [5]. В основном — это болезни, поражающие только один орган или систему тканей и один вид животных или родственные виды, принадлежащие к одному семейству или отряду [15]. К группе медленных инфекций животных относятся как болезни, вызываемые прионами -губкообразная энцефалопатия КРС, скрепи, так и вирусами — алеутская болезнь норок, инфекционная анемия лошадей, артрит-энцефалит коз и другие болезни [54].

Для медленных инфекций характерно отсутствие сезонности и периодичности эпизоотии, географической приуроченности. В то же время чётко прослеживается энзоотичность болезней [10].

Дувас Анджелин и Эресман Гленн из Университета Южной Калифорнии, используя ПЦР-анализ, представили доказательства инфицирования вирусом АЭК людей. Возбудитель АЭК передается со свежим (не подвергавшимся пастеризации) козьим молоком, что объясняет его широкое распространение среди людей в странах с активным козоводством: Мексика, Центральная Америка. Контакт человека с вирусом АЭК может стимулировать иммунный ответ на него, обуславливающий перекрестную реакцию с ВИЧ-1 в лабораторно-диагностических методах [14].

В Российской Федерации по последним данным 23 млн. голов мелкого рогатого скота (овцы, козы). В последнее время интерес к козоводству связан с возрастающей потребностью населения в диетических продуктах питания, к которым относится козье молоко. Наметилась тенденция к формированию системы фермерских козоводческих хозяйств, пополняющих отечественный генофонд животных по каналам Международной Ассоциации Козоводов.

По данным Всемирной организации здоровья животных OIE АЭК встречается во многих странах мира и на всех континентах (Австралия, Дания, Германия, Франция, Канада, Кения, Норвегия, Великобритания, Новая Зеландия, США и др.). В недавних сообщениях отмечается, что болезнь обнаруживают в тех странах, где до этого ее не регистрировали. Так, в сообщении OIE от 20 апреля 2005 года говорится о возникновении инфекции в Боснии и Герцеговине [45].

Учитывая эпизоотологические особенности АЭК, можно предположить вероятность гораздо более широкого распространения этой болезни в зарубежных странах, чем это отражается данными МЭБ.

Наличие на территории РФ потенциально-восприимчивых животных в сочетании с социально-экономическими фоновыми показателями, указывает на высокую вероятность возникновения и распространения АЭК в России. Кроме того, в козоводческих хозяйствах

России обнаружены случаи заболевания коз, по клиническим и патологоанатомическим признакам напоминающие симптомы АЭК, описанные в научной литературе. Эпизоотологический анализ показал, что такие животные завезены из неблагополучных по АЭК стран. В тоже время, в РФ отсутствуют как средства диагностики болезни, так и меры борьбы с ней.

В связи с вышеизложенным, проведение научных исследований по изучению эпизоотологии АЭК, разработке средств и методов диагностики, мер борьбы с болезнью является актуальным.

Цель и задачи исследований

Цель работы: провести эпизоотологический мониторинг артрита-энцефалита коз в Российской Федерации, разработать средства и методы диагностики болезни, а также комплекс мероприятий по ликвидации и профилактике АЭК.

Для достижения поставленных целей необходимо было решить следующие задачи:

Провести эпизоотологический анализ нозоареала АЭК в мире.

Определить и ранжировать зоны риска возникновения АЭК на территории РФ. Разработать пространственно-динамическую модель АЭК на территории РФ.

Провести эпизоотологическое обследование парнокопытных жвачных для выявления вируса АЭК в зонах высокого риска возникновения болезни.

Разработать тест-систему на основе ПЦР для выявления генома вируса АЭК.

Определить восприимчивость культур клеток, КРС и белых мышей к заражению вирусом АЭК.

Разработать и апробировать на практике комплекс мер по профилактике и борьбе с АЭК в животноводческих хозяйствах.

Научная новизна работы:

В результате проведенных исследований впервые установлена циркуляция вируса АЭК на территории РФ в стадах коз молочного направления. Изучены клиническое проявление и патологоанатомические изменения у естественно инфицированных АЭК коз.

Определена чувствительность первичных и перевиваемых культур клеток и лабораторных животных (мышей) к вирусу АЭК.

Определены и ранжированы зоны риска возникновения артрита-энцефалита коз на территории РФ. Разработана пространственно-динамическая модель АЭК на территории РФ.

Разработана тест-система на основе метода ПЦР для выявления генома вируса АЭК, определена ее диагностическая чувствительность и специфичность.

Разработан проект «Правил по борьбе с артритом-энцефалитом коз».

Личный вклад соискателя

Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором самостоятельно. В выполнении работы по разделу «Разработка набора препаратов для выявления РНК вируса АЭК методом ПЦР» практическую и консультативную помощь оказывали сотрудники ГНУ ВНИИВВиМ: Цыбанов С.Ж., Жигалева О.Н., Бурдинский В.Г., а по разделу «Определение чувствительности культур клеток к заражению вирусом АЭК» — Юрков С.Г., Филатов А.В.

Практическая значимость и реализация результатов исследования

Разработанные «Методические рекомендации по выявлению РНК вируса артрита-энцефалита коз методом полимеразной цепной реакции», утверждены РАСХН от 12 декабря 2007 г. и рекомендованы для использования при идентификации указанного возбудителя и его дифференциации от генетически родственных вирусов семейства Ретровирусов.

Полученные в экспериментальных исследованиях данные использовались при разработке мер профилактики и ликвидации артрита-энцефалита коз. Разработанные «Правила по борьбе с артритом-энцефалитом коз» рассмотрены учёным советом ВНИИВВиМ 14 октября

2005 года и представлены на утверждение в Департамент ветеринарии МСХ
РФ.

Проведение мероприятий согласно предложенным «Ветеринарным правилам» позволило в течение 2-х лет оздоровить от АЭК ранее неблагополучное козоводческое хозяйство Тверской области.

Выделен и идентифицирован на перевиваемой культуре клеток и лабораторных животных вирус АЭК.

Читайте также:  Дипроспан аналог

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на Международной научно-практической конференции «Молодежь и наука XXI века» (г. Ульяновск,

2006 г.) и представлены на заседаниях Ученого совета ВНИИВВиМ (2005-
2007гг.).

Публикация результатов

Результаты основных этапов диссертационной работы опубликованы в 9 статьях в материалах Международных научно-практических конференций ВНИИВВиМ (г. Покров), УГСХА (г. Ульяновск), Уральского НИВИ (г. Екатеринбург), Бурятского СХИ (г. Улан-Уде); 3 статьи опубликованы в журнале «Ветеринария».

Основные положения, выдвигаемые на защиту

Результаты эпизоотологического анализа мирового нозоареала АЭК.

Пространственно-динамическая модель АЭК на территории РФ.

Тест-система на основе ПЦР для выявления генома вируса АЭК.

Эпизоотологический мониторинг, клинические, патологоанатомические проявления АЭК в неблагополучных хозяйствах, у естественно и экспериментально зараженных животных;

Рекомендации по профилактике и ликвидации артрита-энцефалита коз.

Благодарности

Выполнение настоящей работы, качественный анализ её результатов были бы невозможны без непосредственного участия ряда сотрудников ВНИИВВиМ. Отдельные этапы экспериментальных работ выполнены совместно с коллективом лаборатории «Эпизоотологии», а также сотрудниками лабораторий «Биофизики», «Культур клеток с музеем клеточных штаммов»: А.Ю. Чичикиным, О.Н. Бурдинской, С.Ж. Цыбановым, О.Н. Жигалевой, С.Г. Юрковым, за что автор выражает глубокую признательность.

Морфология, физико-химическая характеристика и строение генома лентивирусов

По современной классификации международного комитета по таксономии вирусов (МКТВ) возбудитель артрита-энцефали га коз относится к роду Lentivirus семейства Retroviridae [5; 14; 30].

Морфогенез вируса АЭК идентичен морфогенезу вируса ВМО: частицы типа С ретровируса диаметром 100-120 нм почкуются на плазматических мембранах инфицированных клеток. Почкующаяся частица содержит электронноплотную внутреннюю структуру, имеющую форму полумесяца. После созревания частицы отпочковываются в межклеточное пространство; зрелые зкстрацеллюлярные вирионы имеют отчетливый промежуточный слой и элекгронноплотное, центрально расположенное ядро [5; 23; 28; 33].

Вирион сферический (диаметр, примерно, 100 им) оболочечный, с гликопротеиновыми поверхностными выступами (8 нм в длину). Внутреннее ядро включает сферический нуклеокапсид (нуклеоид), расположенный в виде стержня или усеченного конуса у представителей рода лентивирусов.

Протеины составляют около 60 % сухой массы вириона. Два оболочечных протеина: SU (surface — поверхностный) и ТМ (transmembrane — трансмембранный), кодируются вирусным геном env. Внутренние неглпкозилированные 3-6 структурных протеинов кодируются геном gag. Расположение от N-конца: MA (matrix — матрикс); протеин, обнаруженный у некоторых вирусов, с неопределенной функцией; СА (capsid protein -капсидный протеин); NC (nucleocapsid — нуклеокапсид). Протеин МА часто ацилирован с меристиловой частью, ковалентно связанной с аминоконцевым глицином. К другим протеинам относятся: протеаза (PR, кодируемая геном pro), обратная транскриптаза (RT, кодируемая геном ро!) и интеграза ([N, кодируемая геном рої). У некоторых вирусов присутствует Эитраза (DU), роль которого не ясна. Геном представлен двуцепочной РЫК (мономер РНК: односпиральная, линейная с позитивной полярностью, размер 7-11 kb), составляющей 2 % сухого веса вириона. Структура генома лентивирусов представлена на рис. 1. Размер генома 9,3 kb; расположение генов: gag-pro-pol-vif-vprat-rev-vpu-env-nef. Размер длинных концевых повторов (LTR) 600 нуклеотидов, 450 нуклеотидов -регион U3, 100 нуклеотидов — R, 80 нуклеотидов — U5 [16; 44; 80].

Вирионы чувствительны к нагреванию, детергентам и формальдегиду. Поверхностные гликопротеины могут быть частично удалены протеолитическими ферментами. Относительно устойчивы к УФ облучению. Плавучая плотность вируса АЭК составляет 1,16-1,18 г/см3, Sao» 600S (в сахарозе), т.е. идентична плотности вируса ВМО [ 16].

Культивирование вируса АЭК

Кровь от больных АЭК коз в объёме 20 см брали стерильно из ярёмной вены во флакон, содержащий 1-2 см ЭДТА, приготовленного на физиологическом растворе. К объёму взятой крови приливали 500 см стерильной дистиллированной воды, что приводило к лизису эритроцитов вследствие гипотонического шока. Через 10-15 секунд вносили 400 см3 ФБР. Содержимое флакона перемешивали (не допуская образования пены) и центрифугировали при 3000 g в течение 15 минут. Надосадочную жидкость сливали, а осадок ресуспендировали в 20 см3 ФБР, центрифугировали при 800 g в течение 5 минут (отмывание физ. раствором повторяется 2 раза). Все операции проводили в стерильных условиях. Осадок клеток после последнего цикла отмывания ресуспендировали в 10 мл среды Игла-MEM с 10 % сыворотки КРС. Подсчитывали количество живых клеток. Для этого суспензию клеток и краску (1 % раствор трипанового синего на физ. растворе) смешивали в лейкоцитарном меланжере и сразу же заряжали в камеру Горяева. Живые клетки краску не воспринимали и выглядели бесцветными, тогда как, мёртвые клетки и их детрит окрашивались в синий цвет.

Сокультивирование ЛПК с клетками культуры ЛЭО При выращивании ЛПК на матрасах, объёмом 50 см3, смешивали 20 см3 суспензии ЛЭО с 5 CMJ суспензии ЛПК (концентрация клеток в 1 мл лейкоцитарной суспензии 1-24 01). При работе на чашках Кар ел я по 2 см3 ЛПК сокультивировали с 8 см» суспензии клеток ЛЭО. Инфицированную культуру клеток инкубировали в стационарных условиях при 37 С в течение 7-Ю дней. После чего проводили сокультивирование заражённой культуры с чистой суспензией. Монослой снимали трипсин-версеновым раствором в соотношении 1:4. Сокультивирование заражённой суспензии ЛЭО с чистой проводили в соотношении 1:1. Выявление накопления генома ВАЭК определяли постановкой ПЦР с использованием специфичных праймеров, комплементарных последовательности gag-гена ВАЭК, полученных из GeneBank.

Монослойную инфицированную вирусом АЭК культуру клеток ЛЭО выращивали на чашках Кареля. Затем культуральную жидкость удаляли и монослой промывали двукратно ФБР. Клетки снимали со стекла механически. Собранные клетки ресуспендировали в небольшом количестве физиологического раствора (1/100 от исходного объёма вируссодержащей жидкости), осаждали центрифугированием при 2000 об/мин в течение 10 минут. Клетки трижды замораживали — оттаивали, и клеточный детрит удаляли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость использовали в качестве антигенов. Нормальный антиген готовили аналогично из неинфицированыой культуры клеток ЛЭО.

Для получения мононуклеарных клеток крови использовали несколько методик. В наиболее простой методике используется явление осмотического лизиса эритроцитов крови при низкой ионной силе раствора. При этом белые кровяные клетки практически полностью выдерживают данную процедуру, сохраняя жизнеспособность.

При обработке крови данным методом для лизиса эритроцитов к одному объему крови добавляют 20 объемов дистиллированной воды, а затем вносят равный объем фосфатного солевого буфера (ФСБ) в двукратной концентрации. После центрифугирования в течение 15 мин при 1500-2000 g, осадок растворяют в 0,5 см3 воды и используют в качестве материала для выделения нуклеиновых кислот.

Сравнительно-географический и сравнительно-исторический анализ распространения АЭК в мире

Исходными данными для исследования послужила информация о неблагополучных по АЭК территориях.

Сформирован перечень (кадастр) неблагополучных по АЭК территорий за период с 1984 по 2004 гг., включающий информацию по всем странам, существовавшим в этот период на карте мира. Страны дифференцированы на группы с учетом природно-сельскохозяйственных особенностей, уровня развития овцеводства и козоводства и характера нозопрофиля. Учитывались неблагополучные, а также свободные от АЭК страны. В перечне указаны: виды восприимчивых к болезни животных, частота регистрации и широта распространения болезни, число эпизоотических вспышек и случаев, число заболевших, павших, вынужденно убитых, уничтоженных, исследованных, перечислены противоэпизоотические мероприятия, применявшиеся в стране.

Проведено биогеографическое районирование земного шара с учетом:

— наличия животных, больных АЭК,

— типа географического ландшафта, включающего радиационно климатические показатели, типы почвенного покрова, зональное

распределение видов, являющихся резервуарами АЭК.

Для анализа динамики нозоареала АЭК использованы данные, изложенные в разделе «Обзор литературы».

На основании анализа регистрации АЭК в мире получены данные о том, что наибольшее число вспышек с 1996 по 2004 год зарегистрировано в странах Европы и Северной Америки, далее по убыванию идут Азия, Африка, Австралия и Океания, Южная Америка. Из 161 страны, задействованной в системе отчётности ФАО по АЭК, циркуляция вируса зарегистрирована в 43-х.

В Швейцарии, Франции, США, Австралии и Новой Зеландии разработана программа борьбы с вирусом АЭК, которая обеспечивает существенное снижение числа инфицированных животных [100].

Несмотря на то, что по физико-химическим свойствам возбудитель АЭК является слабоустойчивым к воздействию факторов окружающей среды (УФЛ, температура, рН) его распространение, как и степень проявления, находятся в слабой зависимости от природно-климатических условий. Вирус АЭК циркулирует во всех географических зонах, где используются в сельском хозяйстве или обитают козы и другие потенциально восприимчивые животные.

Динамику напряженности эпизоотического процесса АЭК оценивали по значениям изменения во времени индексов инцидентности болезни. Под инцидентностью понимали число новых случаев или вспышек, имевших место в популяции риска в конкретном географическом регионе (страна) в пределах определенного интервала времени (календарный год) [26].

Анализ динамики нозоареала АЭК неблагополучных стран свидетельствует о выраженной трансгрессии нозоареала. Как свидетельствуют данные представленные на рис. 3, динамика эпизоотической ситуации по АЭК характеризуется ростом напряженности в период с 1996 по 2004 гг. (табл. 3). В результате анализа закономерностей географического распространения болезни в Евразии, Австралии, Америке и Африке выделено 6 зон (А, В, С, D, Е, F), где болезнь имеет различное распространение.

Энзоотичные зоны А, В и С полностью соответствуют экваториальному, субэкваториальному и тропическому климатическим поясам и частично зонам субтропического пояса, прилегающим к тропическому поясу. Здесь вспышки болезни регистрируют наиболее часто.